线粒体做法
线粒体的提取步骤如下:
组织匀浆
称取50-200mg新鲜组织(如肝脏、脑、心肌等),用PBS冲洗。
用剪刀将组织剪为0.5cm²碎块,放入小容量玻璃匀浆器内。
估计组织块总体积,加入1.5ml冰预冷的MitoSdution。
上下研磨组织20次。
培养细胞匀浆
消化细胞,PBS洗涤,800×g离心5~10分钟收集细胞。
计数,每次提取需要2-5×10^6个细胞。
将细胞悬液转移到小容量玻璃匀浆器内,用间隙严密的研杵研磨细胞30-40次。
离心分离
将组织或细胞匀浆物转移到离心管中。
800×g离心5分钟,4℃下离心,以去除细胞核、大的膜碎片和未裂解细胞。
收集上清液并转移到新的离心管中,800×g离心5分钟,再次去除细胞碎片。