线粒体做法

线粒体的提取步骤如下:

组织匀浆

称取50-200mg新鲜组织(如肝脏、脑、心肌等),用PBS冲洗。

用剪刀将组织剪为0.5cm²碎块,放入小容量玻璃匀浆器内。

估计组织块总体积,加入1.5ml冰预冷的MitoSdution。

上下研磨组织20次。

培养细胞匀浆

消化细胞,PBS洗涤,800×g离心5~10分钟收集细胞。

计数,每次提取需要2-5×10^6个细胞。

将细胞悬液转移到小容量玻璃匀浆器内,用间隙严密的研杵研磨细胞30-40次。

离心分离

将组织或细胞匀浆物转移到离心管中。

800×g离心5分钟,4℃下离心,以去除细胞核、大的膜碎片和未裂解细胞。

收集上清液并转移到新的离心管中,800×g离心5分钟,再次去除细胞碎片。